5-aminofluorescein

5-Aminofluorescein (også kaldet 5-AF eller Fluoresceinamin) er meget udbredt som et fluorescerende mærkningsreagens. Den primære amin af 5-Aminofluorescein kan reagere med carboxylgrupper (via EDC/NHS-aktivering), aldehyder, ketoner eller aktiverede estere (f.eks. NHS-estere) for at danne stabile amid- eller iminbindinger. Det udviser et excitationsmaksimum ved ~490 nm (λmax = 496 nm i boratbuffer pH 8,5) og et emissionsmaksimum ved ~515 nm, hvilket leverer et lysegrønt signal med god fotostabilitet og et Stokes-skift på omkring 40 nm. Dens fluorescensintensitet er pH-afhængig og øges især under alkaliske forhold (pH 8-9), hvilket tilskrives ændringer i aminogruppens protonationstilstand.

5-Aminofluorescein har fundet bred anvendelse i biologisk og medicinsk forskning - fra mærkning af proteiner og antistoffer til konstruktion af målrettede lægemiddelleveringssystemer og fluorescerende sensorer. 5-Aminofluorescein er også et nøglemellemprodukt i syntesen af ​​fluorescein isothiocyanat (FITC Isomer I), et af de mest populære reagenser til proteinmærkning.

Produktparametre

Bemærkninger om forberedelse og opbevaring

5-AF syntetiseres typisk med udgangspunkt i 4-nitrophthalsyre, efterfulgt af reduktion (f.eks. med hydrazin/FeOOH) og kondensation med resorcinol i methansulfonsyre. Råproduktet er en blanding af 5- og 6-isomerer, som adskilles ved krystallisation. Moderne metoder (mikrobølge-assisteret eller enzymatiske) kan forbedre udbyttet og reducere biprodukter. Slutoprensning ved HPLC sikrer ≥95% renhed, med struktur bekræftet ved NMR og MS.

Opbevaring - Sammensætningen er følsom over for lys, luft og fugt. Opbevares i en forseglet, argon-skyllet beholder ved 4°C i mørke. Til langtidsopbevaring (>6 måneder) anbefales -20°C som pulver (stabil i mindst 3 år). Opløsninger i DMSO kan opbevares ved -80°C i 6 måneder eller ved -20°C i 1 måned. Undgå gentagne fryse-optøningscyklusser. Transport ved omgivelsestemperatur er acceptabel, hvis den er beskyttet mod lys og fugt.

Ofte stillede spørgsmål (FAQ)

Q1: Hvad er forskellen mellem 5-Aminofluorescein (5-AF) og FITC? Hvordan vælger jeg?

A: Begge er grønt-fluorescerende farvestoffer, men deres reaktive grupper er forskellige.

● 5-AF har en primær amin (–NH₂). Det kræver aktivering af et måls carboxylgruppe (ved hjælp af EDC/NHS) før konjugering. Bedst til mærkning af molekyler, der allerede indeholder en carboxylgruppe.

● FITC har en isothiocyanatgruppe (–N=C=S), der reagerer direkte med aminer på målet (f.eks. lysinrester i proteiner) – ingen forudgående aktivering nødvendig. FITC er mere praktisk til rutinemæssig proteinmærkning.

● Vælg 5-AF, hvis du har brug for en specifik, orienteret konjugation (f.eks. via et carboxylhåndtag), eller hvis du planlægger at syntetisere brugerdefinerede fluorescerende derivater. FITC er generelt enklere til direkte antistofmærkning.

Q2: Hvad er typiske reaktionsbetingelser for mærkning af biomolekyler med 5-AF?

A: Den mest almindelige metode er amidkobling: aktiver carboxylgrupper på målmolekylet med EDC og NHS (i MES- eller PBS-buffer, pH 5,5-6,5), tilsæt derefter 5-AF og juster til pH 7,5-8,5. Inkuber ved stuetemperatur eller 37°C i 2-4 timer. Til aldehydholdige mål (f.eks. glycoproteiner) skal du bruge reduktiv aminering med natriumcyanoborhydrid. Uomsat farvestof kan fjernes ved afsaltning eller dialyse. Et molforhold mellem farvestof og protein på 5:1 til 20:1 er et godt udgangspunkt.

Hvorfor Cosperpharm? – Vores konkurrencefordele

Kontakt os

Uanset om du har brug for en lille prøve til et piloteksperiment eller bulkmængder til kommerciel produktion, er Cosperpharm klar til at støtte dig. Kontakt os i dag for at diskutere dine krav til 5-Aminofluorescein - og lad os se, hvordan vi kan hjælpe med at flytte dit projekt fremad.