Oversigt
Icatibant acetat er en sygdomsspecifik behandling for hæmangioidema (HAE) udviklet af Shire, som modtog FDA-godkendelse den 25. august 2011, til håndtering af akutte episoder med arvelig angioødem hos voksne i alderen 18 år og ældre. Det er også det tredje lægemiddel godkendt af FDA til behandling af HAE-anfald. Icatibant-acetat har en struktur, der ligner et bradykinin-lignende d-decapeptid, men indeholder fem ikke-protein-afledte aminosyrer. Det virker som en potent, selektiv kompetitiv antagonist af bradykinin type 2 (B2) receptorer, lindrer lokal hævelse, inflammation og smerte forbundet med HAE episoder ved at hæmme virkningerne af bradykinin. HAE repræsenterer kun én af flere potentielle indikationer, for hvilke icatibant kan være indiceret; andre potentielle anvendelser omfatter astma, levercirrhose og andre typer angioødem. Følgelig udviser icatibant-acetat betydelig terapeutisk værdi og brede markedsudsigter.
Kemisk strukturformel afIcatibant acetat
EessentielIinformation
Kinesisk navn:醋酸艾替班特
Engelsk navn: Icatibant acetat
Firma ID：GT-F005
CAS：138614-30-9；130308-48-4
Sserienummer：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH
Molekulær formel：C59H89N19O13S
Molekulær vægt：1304.52
Icatibant acetat MS spektrum
Syntetisk rute
1: Fremstilling af Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-harpiks
Tilsæt 11,1 g 2-chlortrifenylmethylichloridharpiks med en substitutionshastighed på 0,9 mmol/g til fastfasereaktionssøjlen efterfulgt af tilsætning af DMF-kvældet harpiks i 30 minutter. Tilføj 3,50μL DIPEA til 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH og aktiver i 5 minutter; tilsæt derefter den DMF-kvældede harpiks og lad blandingen nå ligevægt efter 10 minutter. Tilføj yderligere 3,50μL DIPEA, reager ved stuetemperatur i 45 minutter og forsegl til sidst med methanol i 20 minutter. Inddamp reaktionsblandingen, vask tre gange med DMF, tre gange med DCM og kontraher derefter tre gange med methanol i henholdsvis 3 minutter, 5 minutter og 8 minutter, hvilket giver Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-harpiks med en målt substitutionshastighed på 0,5 mmol/g.
2：Kobling af Fmoc-Oic-Åh
Vej 10 mmol Fmoc-Arg (Pbf)-CTC-harpiks og tilsæt det til en fastfasereaktor, kvæld det i DMF i 0,5 timer, fjern derefter Fmoc-beskyttelsen to gange ved hjælp af 20 % DBLK-opløsning i henholdsvis 10 minutter og 5 minutter; efter vask konjugeres det med Fmoc-Oic-OH. Opløs 11,73 g Fmoc-Oic-OH, 4,9 g HOBt og 6,1 mL DIC i DCM (en lille mængde DMF kan tilsættes til solubilisering), aktiver blandingen i et isvandbad i 7 minutter, overfør den derefter til fastfasereaktoren og reager ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens slutpunkt bestemmes ved indantronmetoden. Efter afslutning, aspirer reaktionsblandingen, vask med DMF, fjern Fmoc-beskyttelsen to gange ved hjælp af 20% DBLK-opløsning i henholdsvis 10 minutter og 5 minutter, vask igen og klargør til kobling med den næste aminosyre.
3：Kobling af Fmoc-D-Cit-Åh
Opløs 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g HOAt og 11,4 g HATU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,87 g DIPEA under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og omsæt ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens afslutning bestemmes ved indiolmetoden. Efter reaktion fjernes reaktionsblandingen, vaskes med DMF, og Fmoc-beskyttelsen fjernes med 20 % DBLK-opløsning. Efter vask forberedes til kobling med den næste aminosyre.
4：Kobling af Fmoc-Ser(tBu)-Åh
Opløs 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g HOAt og 6,1 ml DIC i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Efter aktivering under isvandbad i 7 minutter overføres blandingen til en fastfasereaktor og reagere ved stuetemperatur i 1–2 timer; reaktionens afslutning bestemmes ved indiolmetoden. Efter afslutning, fjern reaktionsblandingen, vask med DMF, fjern derefter Fmoc-beskyttelsen ved hjælp af 20% DBLK-opløsning, efterfulgt af vask, før du fortsætter til kobling med den næste aminosyre.
5：Kobling af Fmoc-Thi-Åh
Opløs 11,79 g Fmoc-Thi-OH, 5,00 g HOBt og 11,37 g HBTU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,87 g DIPEA under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og tillad reaktion ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens afslutning bestemmes ved indiolmetoden. Efter reaktion fjernes reaktionsblandingen, vaskes med DMF, og Fmoc-beskyttelsen fjernes med 20 % DBLK-opløsning. Efter vask forberedes til kobling med den næste aminosyre.
6：Kobling af Fmoc-Gly-Åh
Opløs 8,91 g Fmoc-Gly-OH, 5,00 g HOBt og 9,63 g TBTU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,63 g TMP under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og tillad reaktion ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens afslutning bestemmes ved indanonmetoden. Efter reaktion fjernes reaktionsblandingen, vaskes med DMF, og Fmoc-beskyttelsen fjernes med 20 % DBLK-opløsning. Efter vask forberedes til kobling med den næste aminosyre.
7：Kobling af Fmoc-Hyp(tBu)-Åh
Opløs 12,27 g Fmoc-Hyp(tBu)–Åh, 5,00 g HOAt og 9,66 g TATU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,63 g TMP under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og omsæt ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens slutpunkt bestemmes ved indiolmetoden. Efter afslutning fjernes reaktionsblandingen, vaskes med DMF, og Fmoc-beskyttelsen fjernes med 20 % DBLK-opløsning. Efter vask forberedes til kobling med den næste aminosyre.
8：Kobling af Fmoc-Pro-Åh
Opløs 10,11 g Fmoc-Pro-OH, 5,00 g HOAt og 11,4 g HATU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,87 g DIPEA under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og omsæt ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens slutpunkt bestemmes ved indiolmetoden. Efter afslutning fjernes reaktionsblandingen, vaskes med DMF, og Fmoc-beskyttelsen fjernes med 20 % DBLK. Efter vask forberedes til kobling med den næste aminosyre.
9：Kobling af Fmoc-Arg(Pbf)-Åh
Opløs 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt og 11,4 g HATU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,87 g DIPEA under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og omsæt ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens afslutning bestemmes ved indiolmetoden. Efter reaktion fjernes reaktionsblandingen, vaskes med DMF, og Fmoc-beskyttelsen fjernes med 20 % DBLK-opløsning. Efter vask forberedes til kobling med den næste aminosyre.
10：Kobling af Fmoc-D-Arg(Pbf)-Åh
Opløs 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt og 11,4 g HATU i DCM (med en lille mængde DMF tilsat til solubilisering). Tilsæt 3,87 g DIPEA under isvandsbad og aktivér i 7 minutter; overfør derefter blandingen til en fastfasereaktor og omsæt ved stuetemperatur i 1–2 timer. Reaktionens slutpunkt bestemmes ved indiolonmetoden. Fjern reaktionsblandingen efter afslutning, vask med DMF, og brug derefter 20 % DBLK til at fjerne Fmoc-beskyttelsen. Vask tre gange med DMF, tre gange med DCM og tre gange med methanol til sammentrækning (i henholdsvis 3 minutter, 5 minutter og 8 minutter), efterfulgt af vakuumtørring for at opnå etibant-peptidacetatharpiks.
HPLC-kromatogram af Icatibant-acetat
11：Harpikspyrolyse af Icatibant-acetat
Forbered 200 ml lysereagens indeholdende 190 ml trifluoreddikesyre, 6 ml triisopropylsilan og 4 ml vand, og forafkøl det i et køleskab i 30 minutter. Tilsæt 20,0 g etibant-peptidacetatharpiks til en 500 ml rundbundet kolbe, og tilsæt derefter det forberedte 200 ml lyseringsreagens til harpiksen under omrøring under et isbad og under nitrogenstrøm. Efter 30 minutters reaktion fjernes isbadet og reaktionen fortsættes ved stuetemperatur i 2 timer. Filtrer harpiksen og opsaml filtratet. Vask harpiksen med en lille mængde trifluoreddikesyre, filtrer og kombiner filtraterne. Tilsæt gradvist filtratet til 20 L iskold ether; dannes et hvidt bundfald. Centrifuger ved 3000 rpm for at opsamle bundfaldet, vask fem gange med iskold ether og tør under reduceret tryk for at opnå 10,3 g råt peptid med HPLC-renhed >90%.
